Медицинский портал - сайт для врачей и фармацевтов

Лабораторная диагностика синегнойной палочки

  • 31 августа 2019
  • 94
  • Средний балл: 5 из 5

Синегнойная палочка – вид условно-патогенных грамотрицательных микроорганизмов, вызывающий вспышки внутрибольничных инфекций.

анализ на синегнойную палочкуРост инфицированности среды поднимает анализ на синегнойную палочку на новую высоту профессионализма.

Качественно выполненное исследование способно оперативно выявить возбудитель, что позволит медперсоналу эффективно лечить больных и бороться с инфекцией в том числе в условиях стационара.

Больше статей в журнале «Справочник заведующего клинико-диагностической лабораторией» Активировать доступ

Синегнойная палочка (Pseudomonas aeruginosa) - грамотрицательная подвижная прямая аэробная палочка, выделяющая водорастворимые пигменты, окрашивающие в соответствующий (сине-зеленый, зеленый флюоресцирующий, красный, черный или желтый) цвет раневые повязки или питательные среды.

Широкое распространение антимикробных препаратов в медицине, ветеринарии и животноводстве привело к широкому распространению Pseudomonas aeruginosa и ее лекарственной устойчивости.

Доказано, что антибиотики нарушают естественный биоценоз любого живого организма и подавляют большинство видов обычной бактериальной флоры, что, в свою очередь, способствует росту синегнойной бактерии, обладающей устойчивостью ко многим АМП в кишечнике, полости рта, дыхательных путях, мочеполовой системе животных и человека.

Сегодня это привело к тому, что число носителей Pseudomonas aeruginosa возросло в разы, а продукты их жизнедеятельности приводят к постоянному инфицированию внешней среды.

Проблемы взаимодействия КДЛ с клиническими подразделениями: как применить процессный подход. Рекомендации Росздравнадзора в журнале «Справочник заведующего КДЛ»

Анализ на синегнойную палочку

Диагностика заболеваний, вызванных синегнойной палочкой, основана на проведении исследования одним из следующих методов:

  • бактериологический;
  • ПЦР (полимеразная цепная реакция);
  • серологический.

Бактериологический метод предполагает посев на питательные среды мазков, взятых из очага инфекции (зева, уретры, раны) или биоматериала больного (крови, мочи, ликвора, выпотной жидкости).

По характеру и свойствам выросшей бактериальной колонии специалист судит о разновидности микроорганизма и его чувствительности к антибактериальным средствам или бактериофагам.

Метод ПЦР является высокочувствительным и позволяет выявить даже единичные микробные клетки в исследуемом образце.

При помощи специальных реагентов лаборант выделяет плазмиды бактерий, многократно копирует их и определяет их наличие в растворе.

В результате анализа указывается наличие возбудителя, его вид и рассчитанное количество микробных тел в исследуемом материале.

Серологическое исследование определяет в крови пациента специфические антитела к синегнойной палочке.

Однако данный метод позволяет лишь косвенно судить о наличии возбудителя, а потому целесообразен только в тех случаях, когда непосредственное выделение патогена сопряжено с какими-либо сложностями (например, при пневмонии или поражении внутренних органов).

Используется следующий материал для анализа:

  • кровь;
  • моча;
  • кал;
  • мокрота;
  • слизь из зева;
  • выпотная жидкость;
  • спинномозговая жидкость.

Образец крови оценивают по следующим показателям:

  1. Наличие антител к Pseudomonas aeruginosa.
  2. Общие клинические показатели.
  3. Антибиотикограмма.

Биоматериал высевают на питательные среды и помещают в специальные боксы на срок от двух недель до двух месяцев.

Объективная оценка динамики лабисследований с помощью критерия RCV: внедрение, применение, перспективы, подробно в журнале «Справочник заведующего КДЛ»

Используя общие факторы, а также реакции при контакте с АМП специалист может определить стадию прогрессирования и локацию.

Учитываются следующие показатели:

  • запах;
  • пигментация и ее степень;
  • скорость развития.

Посев на синегнойную палочку показан при:

  • сопротивлении организма к АМП;
  • длительно протекающие инфекционные заболевания;
  • наличие специфических клинических проявлений;
  • сопутствующие соматические патологии (сахарный диабет, ожирение, пневмония).
  • В статье вы найдете только несколько готовых образцов и шаблонов. В Системе «Консилиум» их более 5000.

Успеете скачать всё, что нужно, по демодоступу за 3 дня?

Активировать

Посев

Сегодня разработаны методы активного выделения Pseudomonas aeruginosa из различных микробных ассоциаций и использование рациональной схемы определения с применением селективных сред.

Их действие заключается в способности 3,4-дихлоранилидпропионовой кислоты сдерживать развитие аэробной флоры, не изменяя при этом роста синегнойной палочки.

Селективные среды состоят из обычного агара с добавлением пропанида (авторское свидетельство N 574472).

Пропанид выпускается в виде 30%-ной эмульсии. Вещество активно используется в сельском хозяйстве и доступно для приобретения в любых количествах. 

Пропанид проявляет мощные дезинфицирующие свойства в отношении микробной флоры, что дало возможность выращивать культуру синегнойной палочки в чистом виде и определять ускоренным методом ее чувствительность к антимикробным средствам.

Процесс приготовления усовершенствованной селективной среды таков:

  1. Расплавленный агар Мартена или мясо-пептонный агар с содержанием пептона не более 1% в количестве 100 мл охладить до температуры 75-80°С.
  2. Добавить 0,3 мл пропанида (30% концентрата эмульсии);
  3. Интенсивно размешать получившийся состав и разлить его в приготовленные заранее стерильные чашки Петри.

Питательная среда готовится в лаборатории непосредственно перед выполнением посева. Чашки Петри с питательной средой необходимо подсушить.

Как КДЛ стандартизировать взаимодействие с клиницистами. Комплект документов в журнале  «Справочник заведующего КДЛ»

Скачать документы

Биологический материал для посева на псевдомонады отбирают в стерильные емкости с соблюдением всех правил асептики по общепринятым методам.

Инкубация биологического материала:

  • материал, собранный с объекта внешней среды, после посева на питательную среду выдерживают 16-18 часов при температуре 41,5±0,5°С и последующие 2 суток при комнатной температуре для появления пигментации;
  • раневое отделяемое инкубируют 16-18 часов при температуре 37°С;
  • смывы с поверхности предметов, рук, аппаратуры, инвентаря предварительно подращивают в мясо-пептонном бульоне или среде Кесслера при температуре 37±0,5°С в течение 18-24 часов, после чего содержимое пробирки (0,5 мл) высевают на селективную среду и тщательно втирают шпателем (смыв с заранее загрязненных поверхностей допустимо предварительно не подращивать).
  • гнойное или раневое отделяемое, мокроту, слизь из зева засевают непосредственно тампоном штрихами на селективную среду.

Выросшие на питательной среде колонии микроорганизмов, подозрительные в отношении Pseudomonas aeruginosa, учитывается, а результат уточняется дальнейшей идентификацией.

Подсчет Pseudomonas aeruginosa в водоемах и бассейнах

Для определения количества синегнойных бактерий в воде природных водоемов и бассейнов используются следующие способы посева:

  1. Мембранные фильтры (образец воды в количестве 1,0 мл, 10,0 мл, 100,0 мл фильтруют в приборах типа Зейтца через стерильные мембранные нитроцеллюлозные фильтры N 2 или N 3, затем фильтры переносят на селективную питательную среду с пониженной концентрацией агара (1%-1,5%).
  2. Метод брожения (исследуемую воду (10 и 100 мл) набирают в пробирки и флакон соответственно с 1 и 10 мл концентрированной лактозо-пептонной или глюкозо-пептонной среды; посев по 1 мл последующих 10-кратных разведений воды проводят в пробирки с 10 мл питательной среды нормальной концентрации и выдерживают в течение суток при температуре 37±0,5°С; для максимально точных результатов используется схема трехрядового посева, в то время как однорядовая схема посева может быть использована для получения ориентировочных данных (из каждого флакона содержимое высевают петлей штрихами на поверхность селективной среды в чашки Петри, разделенные на 3-4 сектора - посевной материал следует брать так, чтобы получить изолированные колонии).

Расчетные таблицы, приведенные в ГОСТе 18963-73, позволяют вести количественный учет Pseudomonas aeruginosa.

Сточные воды высевают сразу на питательную среду в количестве 0,1 мл и 1мл воды или ее 10-кратных разведений.

Вода втирается шпателем на поверхность среды, а выросшие на ней колонии пересчитываются на 1 л исследуемого материала. При небольшой степени загрязнения воды допустимо использование бродильного метода.

Бактериологическая диагностика стафилококковых инфекций, алгоритм в журнале  «Справочник заведующего КДЛ»

Идентификация бактерии

Типичные штаммы Pseudomonas aeruginosa на агаровой питательной среде образуют крупные, полупрозрачные, плоской формы, сероватого оттенка слизистые колонии с шероховатой поверхностью.

Среда вокруг колонии окрашивается в сине-зеленый или зеленовато-желтый цвет, однако атипичные формы этого микроорганизма не пигментируют агар.

Культура Pseudomonas aeruginosa выделяет запах. Аромат типичных культур – приятный, натуральный, напоминающий запах цветов лицы, фиалки, жасмина или "земляничного" мыла.

Атипичные культуры выделяют неприятный запах с примесью аммиака. На питательных средах с добавлением пропанида к вышеперечисленным запахам добавляется химический запах пестицида. 

Внешние свойства синегнойной палочки (по данным микроскопического исследования):

  • прямая или немного искривленная форма с закругленными концами размером 0,5-0,6 1-3 мк;
  • при окрашивании по Граму – отрицательна;
  • не образует споры;
  • в мазке располагается одиночно, парно или короткими цепочками.

Дифференциальные признаки Pseudomonas aeruginosa:

  • активность цитохромоксидазы;
  • аэробное окисление глюкозы и отсутствие разложения ее в анаэробных условиях (под слоем жидкого вазелина) в среде Хью-Лейфсона;
  • рост в бульоне при 43°С;
  • синтез ацетона.

Синегнойная палочка проявляет цитохромоксидазную активность: водный 1%-ный раствор диметилпарафенилендиамин-гидрохлорида и 1%-ный раствор альфа-нафтола в 95-градусном спирте смешивается в соотношении 3:2 и наносится капельно на колонии.

Они при этом приобретают темно-синий оттенок в течение 15-25 секунд.

Синегнойная палочка:

  • разжижает желатин, разлагает ксилозу и галактозу с образованием кислоты (старые и атипичные штаммы могут утрачивать эти свойства);
  • не способна производить ферментацию лактозы, сахарозы, сорбита;
  • гидролизует аргинин в аэробных и анаэробных условиях.

Штамм в специальной среде (бактопептон - 1 г, хлористый натрий - 5 г, двухзамещенный фосфат калия - 0,3 г, агар - 3 г, фенол красный - 0,01 г, гидрохлорид аргинина - 10 г, дистиллированная вода - до 1 л, pH - 7,2) выдерживают в двух пробирках, в одной из которых созданы анаэробные условия (под слоем жидкого вазелина).

Аргининдегидролазная активность определяется по изменению цвета индикатора в красный в обеих пробирках.

Определение микроба, как апиоциногенного штамма Pseudomonas aeruginosa, должна, кроме прочего, подтверждаться его способностью редуцировать трифенил тетразолий хлорид, восстанавливать нитраты до азота и расти на среде Плоскирева.

Молекулярные методы как новые возможности диагностики инфекций, подробно расскажем в журнале  «Справочник заведующего КДЛ»

Определение чувствительности синегнойной палочки к антибиотикам

Для определения чувствительности Pseudomonas aeruginosa к антимикробным препаратам биологический материал (гной, отделяемое из раны и др.) высевают на селективную среду при помощи тампона, затем растирают стерильным шпателем и выдерживают в течение 18-20 часов при температуре 37°С.

Образовавшиеся колонии смывают физиологическим раствором, а получившуюся взвесь исследуют для определения чувствительности к антибиотикам.

Используется метод диффузии в агаре с применением дисков с лекарственными препаратами, а также метод серийных разведений.

В срочной ситуации показано использование ускоренной методики определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам, основанный на методе диффузии в агаре с применением бумажных дисков.

Ответ можно получить по истечении 20-22 часов.

Тампон с биоматериалом опускают в пробирку с 2-3 мл мясо-пептонного или другого питательного бульона и помещают в термостат на 3-4 часа при 37°С.

Затем в чашку Петри на поверхность агара с пропанидом наносят 0,3 мл взвеси, растирают по поверхности среды стерильным стеклянным шпателем до исчезновения влаги и сверху плотно накладывают диски с антибиотиками.

Диски размещают на равном расстоянии один от другого и примерно в 2 см от края чашки.

Чашку помещают в термостат перевернутыми (это позволяет избежать размывания газона конденсатом) и выдерживают при 41°С не менее 14-15 часов.

logo
Хотите скачать файл?


Чтобы скачать этот файл и получить доступ к другим документам, зарегистрируйтесь. Это займет 1 минуту:)

В подарок пришлем готовые образцы приказов по ВКК!

У меня есть пароль
напомнить
Пароль отправлен на почту
Ввести
Введите эл. почту или логин
Неверный логин или пароль
Неверный пароль
Введите пароль
Я тут впервые
ИЛИ ВОЙТИ ЧЕРЕЗ СОЦИАЛЬНЫЕ СЕТИ
Зарегистрироваться
Хотите скачать файл?


Чтобы скачать этот файл и получить доступ к другим документам, зарегистрируйтесь. Это займет 1 минуту:)

В подарок пришлем готовые образцы приказов по ВКК!

У меня есть пароль
напомнить
Пароль отправлен на почту
Ввести
Введите эл. почту или логин
Неверный логин или пароль
Неверный пароль
Введите пароль
Я тут впервые
ИЛИ ВОЙТИ ЧЕРЕЗ СОЦИАЛЬНЫЕ СЕТИ
Зарегистрироваться
Сайт для медицинских работников!


Provrach.ru - профессиональный сайт и многие статьи здесь закрыты. Для медработника регистрация займет 1 минуту.

В подарок пришлем готовые образцы приказов по ВКК!

У меня есть пароль
напомнить
Пароль отправлен на почту
Ввести
Введите эл. почту или логин
Неверный логин или пароль
Неверный пароль
Введите пароль
Я тут впервые
ИЛИ ВОЙТИ ЧЕРЕЗ СОЦИАЛЬНЫЕ СЕТИ
Зарегистрироваться

Гость,
заберите Ваш подарок!

Активировать

Доступ к системе «Консилиум»

Гость,
заберите Ваш подарок!

Активировать

Доступ к журналу «Справочник заведующего КДЛ»

Сайт использует файлы cookie. Они позволяют узнавать вас и получать информацию о вашем пользовательском опыте. Это нужно, чтобы улучшать сайт. Посещая страницы сайта и предоставляя свои данные, вы позволяете нам предоставлять их сторонним партнерам. Если согласны, продолжайте пользоваться сайтом. Если нет – установите специальные настройки в браузере или обратитесь в техподдержку.